C-NKG

C-NKG 생쥐와 같은 차세대 면역 결핍 생쥐 모델은 암 면역 치료 연구에 도움이 되는 몇 가지 특징을 가지고 있습니다.

● 성숙한 T 세포, B 세포 및 NK 세포가 부족한다.

● 보체활동 감소

● 대식세포와 수지상세포의 기능장애

● 나이가 들면서 T와 B 세포의 누출 발생률이 매우 낮다

● 림프종 발병률 극히 낮음(NOD SCID 모델과 다름)

● 장·단기 실험에 사용 가능

● 당뇨병에 걸리지 않다

● C-NKG 생쥐는 NOD SCID 생쥐보다 수명이 더 긴 반면, NOD SCID 생쥐는 흉선 림프종(thymic lymphoma)을 발달시키는 경향이 높습니다.

● C-NKG 생쥐는 NOD SCID 생쥐와 비교하여 더 나은 CDX/PDX 이식률을 보였다.

● 인간 조혈모세포(HSCs), 말초혈액 단핵세포(PBMCs), 환자 유래 이종 이식(PDXs) 또는 성체 줄기세포와 조직을 효율적으로 이식한다.

● 종양, 면역, 자가면역질환, 면역치료백신, GvHD/이식, 안전성평가 등의 연구에 사용할 수 있다.

1. Prkdc 유전자 돌연변이

그림 1. Prkdc^scid 돌연변이는 Prkdc 유전자 84 엑손 TAT→TAA에 의해 생성된다.

시퀀싱 결과는 C-NKG 쥐가 Prkdc^scid 돌연변이를 가지고 있음을 보여주었다.

2. Il2rg유전자 녹아웃

그림 2. PCR 을 통해 NKG 생쥐의 II2rg 유전자를 검출한 결과 NKG 생쥐의 II2rg 유전자를 성공적으로 녹아웃되는 것으로 나타났다.

야생형 밴드의 크기는 1430bp이고 녹아웃 단편 밴드의 크기는 388bp입니다.

3.C-NKG 쥐의 말초혈액에서 B, T, NK 세포의 검출

                       
그림 3. C-NKG 마우스는 말초 혈액에 B, T 및 NK 세포가 심각하게 결핍된 중증 복합면역결핍증(SCID) 마우스 모델입니다.

BALB/c 및 C-NKG 마우스의 말초 혈액 샘플을 수집하고 flow cytometric immunophenotypic analysis 을 수행하고 T, B 및 NK 세포의 구성을 통계적으로 비교했습니다. 그 결과 C-NKG 마우스의 말초 혈액에 B 세포(CD3-CD19+), T 세포(CD3+CD19-), 보조 T 세포(CD3+CD4+CD8-), 세포독성 T 세포(CD3+CD4-CD8+) 및 NK 세포(CD335+CD3-)는 BALB/c 마우스와 비교하여 거의 완전히 존재하지 않는 것으로 나타났습니다.

4.C-NKG 생쥐 림프 조직에서 B, T, NK 세포의 검출

그림 4. 중증 복합 면역 결핍(SCID) 마우스 모델 C-NKG 마우스의 림프 조직에는 B, T 및 NK 세포가 심각하게 부족합니다.

^{BALB/c 및 C-NKG 마우스의 림프 조직 샘플을 수집하고 flow cytometric immunophenotypic analysis 을 수행하고 T, B 및 NK 세포의 구성을 통계적으로 비교했습니다. 그 결과 C-NKG 마우스의 림프 조직에 B 세포(CD3-CD19+), T 세포(CD3+CD19-), 보조 T 세포(CD3+CD4+CD8-), 세포독성 T 세포(CD3+CD4-CD8+) 및 NK 세포(CD335+CD3-)는 BALB/c 마우스와 비교하여 거의 완전히 존재하지 않는 것으로 나타났습니다.}

5. huPBMC-C-NKG

그림 1. huPBMC-C-NKG 쥐의 생존 곡선입니다.

huPBMC-C-NKG 마우스는 이식편대숙주병(GvHD)의 발병과 함께 점차 사망했다.

그림 2. 인간 pbmc를 C-NKG 마우스에 이식한 후 말초 혈액의 인간 CD45+ 세포 함량의 변화입니다.

PBMC 이식 후 C-NKG 생쥐의 말초혈액 내 인간 백혈구 함량은 점차 증가하였고, 3주 후 CD45+의 평균 비율은 약 50%였다.

그림 3. 인간 pbmc를 C-NKG 생쥐에 이식한 후 말초혈액 내 인간 CD3+ 세포 함량의 변화.

huPBMC-C-NKG 마우스의 재구성은 T 세포를 위주로 한다.

6. 인간 종양 세포 이종 이식 (CDX) 모델

그림 1. 인간 간암 세포 Huh7 피하 이종 이식종의 성장 곡선.

그림 2. 인간 위암 HGC-27 세포 피하 이종 이식종 성장곡선.

그림 3. Human colon adenocarcinoma SW620 피하 이종 이식종 성장 곡선.

C-NKG 마우스와 NOD/Scid 마우스 모두에 세포를 피하 접종하고 다양한 시점에서 종양 부피를 측정했습니다. 세포 파종량은 5× 106/cell 이며, 데이터는 Mean±SEM 으로 표시되었습니다. 결과는 인간 간암 세포 Huh7, 인간 위암 세포 HGC-27 및 human colon adenocarcinoma 세포 SW620이 C-NKG 마우스 종양 모델을 효과적으로 확립할 수 있음을 보여줍니다.