과학 연구, 특히 지방 세포와 대사 질환 연구에서는 정확하고 효율적인 형광 검출이 필수적입니다. 이 방법은 연구자들이 재조합 효율성을 평가하고, 유전자 발현을 가시화하며, 유전적 계통(genetic lineage)을 추적할 수 있게 해줍니다. 하지만 형광 신호를 검출하는 것은 때때로 어려울 수 있습니다. Cyagen의 Adipoq-iCre 마우스를 사용하면 지방 조직 타겟팅이나 형광 검출의 어려운 문제에 대한 걱정 없이 연구를 순조롭게 진행할 수 있습니다.
Adipoq-iCre 마우스는(제품 번호: C001529) 마우스 지방 조직을 특이적으로 타겟팅하도록 설계된 혁신적인 조건부 마우스 모델입니다. 이 모델은 형광 리포터(Fluorescent reporter) Rosa26-LSL-tdTomato 마우스와 교배할 때 지방 특이적 유전자 타겟팅을 구현하며, 연구에서 신뢰할 수 있고 명확한 결과를 얻을 수 있습니다. 아래 면역형광(Immunofluorescence, IF) 데이터를 통해 Adipoq-iCre 마우스가 지방 관련 유전자 연구에 어떻게 활용될 수 있는지 확인해 보세요.
Cyagen은 첨단 유전자 편집 기술을 활용하여 Adipoq-iCre 마우스를(제품 번호: C001529) 독자적으로 개발했습니다. 이 모델은 마우스 Adipoq 유전자 조절 요소에 의해 구동되는 코돈(codon) 최적화된 Cre 재조합효소(iCre)를 발현합니다. Adiponectin은 ADIPOQ 유전자에 의해 암호화된 중요한 단백질 호르몬으로, 지방 세포에서만 분비되며, 혈당 조절과 지방산 분해 같은 지방 대사 조절에 영향을 미칩니다. iCre 재조합효소의 발현 패턴은 내인성 유전자(endogenous gene)와 유사하며, 마우스 내인성 Adipoq 유전자의 발현에는 영향을 미치지 않습니다.
Adipoq-iCre 마우스를 loxP site가 있는 마우스와 교배하면, 자손 마우스(Progeny mice)는 백색 지방조직 (white adipose tissue, WAT)과 갈색 지방조직 (brown adipose tissue, BAT)에서 Cre 재조합효소 매개 재조합을 통해 특정 지방 조직에 대한 타겟팅 연구를 수행할 수 있습니다.
그림 1: 백색 지방(WAT)과 갈색 지방(BAT)에서의 tdTomato 단백질 발현 면역형광(IF) 검출 결과
Adipoq-iCre 마우스를 조건부로 tdTomato 형광 단백질을 발현하는 Rosa26-LSL-tdTomato 마우스와 교배시킨 후, 태어난 자손 마우스(Progeny mice)의 백색 지방 조직(WAT)과 갈색 지방 조직(BAT)에 대해 면역형광(IF) 검출을 수행하였습니다. 분석 결과, Cre+ 마우스의 지방 조직에서 tdTomato 적색 형광 신호가 유의미하게 발현되는 것이 확인되었습니다.
그림 2: 골격근, 피부, 폐, 심장, 고환, 난소에서 tdTomato 단백질 발현의 면역 형광(IF) 검출 결과
면역 형광(IF) 검출 결과는 Cre+ 마우스의 골격근, 피부, 폐, 기관지에서 부분적인 빨간색 형광이 검출되었고, 심장, 난소 주변 지방, 난소 기질, 황체에서는 소량의 형광 신호가 나타났으며, 고환에서는 형광 신호가 전혀 관찰되지 않았습니다.
Adipoq-iCre 마우스(제품 번호: C001529)는 지방 조직에 대한 우수한 타겟 특이성을 보여주며, Cre 재조합효소가 주로 백색 지방 조직(WAT)과 갈색 지방 조직(BAT)에 집중되어 발현됩니다. 또한 Adipoq-iCre 마우스의 골격근, 피부, 폐 및 심장에서도 부분적인 재조합 신호가 관찰되며, 조직 형태학적 분석에 따르면 이 신호는 지방 세포로 추정됩니다. 이러한 특징을 가진 Adipoq-iCre 마우스 모델은 지방 세포 생물학 및 관련 대사 연구를 위한 이상적인 선택입니다.
Cyagen의 전체 Cre 마우스 모델 리스트를 확인하시고, 추가 연구 지원이 필요하시면 언제든지 문의해 주시기 바랍니다.
형광 검출은 특히 동물 연구 모델에서 재조합 효율성과 유전자 발현을 평가하는 데 매우 중요합니다. 형광 신호가 검출되지 않을 경우, 다음과 같은 원인과 해당 처리 방법을 고려해 보세요.
(1) 형광 신호 소멸
문제: 동결절편(Frozen section)을 준비하는 과정에서 형광 신호가 소멸되는 경우가 많습니다.
해결 방법: 형광 현미경으로 직접 관찰할 때 어두운 상태에서 작업을 진행하십시오. 또한, 면역형광법(IF)이나 면역조직화학분석법(IHC)을 사용할 수 있습니다. 그리고 Adipoq-iCre 마우스를 형광 리포터 마우스와 교배시키면 형광 신호가 강해지고 관찰이 용이해질 수 있습니다.
(2) 잘못된 샘플 처리
샘플 고정, 차단 또는 염색 단계에서의 부적절한 처리는 형광 신호가 약해지거나 사라지는 원인이 될 수 있습니다. 따라서 올바른 처리 절차를 따라야 합니다.
(1) 낮은 재조합 효소 발현 수준
Cre 재조합효소의 발현 수준이 낮거나 활성이 부족할 경우, 타겟 유전자 flox site에서 재조합 효율이 낮아져 형광 신호를 감지할 수 없게 됩니다. 예를 들어, CMV-Cre 마우스의 경우, Cre 유전자가 X 염색체에 타겟팅되어 있으며 무작위 X 염색체의 불활성화로 인해 게놈은 Cre 양성으로 확인되지만, Cre 단백질이 발현되지 않을 수 있습니다. 또한, CMV promoter는 후성유전적 침묵(Epigenetic silencing)에 민감하여 재조합이 발생하지 않도록 할 수도 있습니다.
(2) 유도 조건 부족
예를 들어, Tamoxifen을 사용해 원핵 세포에서 Cre 발현을 유도하는 경우, 유도제의 용량과 투여 타이밍이 정확하지 않으면 Cre 발현에 영향을 미쳐 형광 리포터 마우스 모델인 Rosa26-LoxP-Stop-LoxP-tdTomato의 형광 발현이 달라질 수 있습니다. 따라서, 공식적으로 실험하기 전에 최적 유도 조건을 설정하기 위해 사전 실험을 수행하거나 더 효율적인 Cre 발현 시스템을 시도하는 것이 권장됩니다.
(3) 연구 모델 제작의 영향
예를 들어, 형광 Cre 마우스 모델을 제작할 때, 형광 유전자가 IRES 요소를 통해 downstream에 연결될 수 있습니다. IRES 요소의 특성상 유전자들이 공동 발현되더라도 IRES 요소 뒤에 위치한 유전자의 발현 수준이 상대적으로 낮아 형광 강도에 영향을 미칠 수 있습니다. 또한, 약한 promoter를 사용할 경우, 발현 유도가 약해져 형광 신호를 감지하기가 더욱 어려워집니다.
해결책: Cre 재조합효소 수준을 충분히 확보하고 유도 조건을 최적화하기 위해 사전 실험을 고려해 보세요. IRES-linked 형광 및 약한 promoter가 형광 신호 강도에 영향을 미칠 수 있는 가능성을 염두에 두어야 합니다.
(1) 형광 간섭 백그라운드 최소화
관찰 위치와 깊이의 차이로 인해, 여기광(Excitation light) 및 산란광(Emission light)이 조직에 흡수되어 high background와 낮은 신호 대 잡음비(SNR, Signal-to-Noise Ratio)을 초래하며, 이는 검출 감도를 제한할 수 있습니다. 배경 형광을 최소화하려면 배경 잡음을 줄이는 처리 방법을 사용해 보세요. 예를 들어, 검사 대상 조직에 제모(Depilation)를 시행하거나 자가형광(Autofluorescence) Quencher로 샘플을 처리하며, 자가형광(Autofluorescence)의 피크 파장을 피하는 형광 단백질 또는 염료를 선택하는 것도 도움이 됩니다. 또한 실험 실패 원인을 빠르게 판단할 수 있도록 대조군을 설정하는 것도 중요합니다.
(2) 실험 재료 확인
형광 항체, 형광 염료 및 기타 실험 재료의 품질과 적합성을 확인해 보세요.
(3) 실험 Parameter 확인
적절한 파장을 선택해 보세요. 예를 들어, tdTomato의 경우 여기광 파장 554nm, 산란광 파장 581nm으로 선택합니다.
(4) Genotype 확인
실험 전에 PCR을 통해 샘플의 Genotype을 확인하는 것이 중요합니다. 그다음은 qPCR 또는 Western Blot을 사용하여(샘플에 따라 다름) 특정 조직에서의 발현 상황을 검출합니다.
이러한 잠재적인 문제를 해결함으로써 Adipoq-iCre 마우스 모델을 사용한 연구에서 형광 검출의 효율성을 극대화하고, 확고한 실험 결과를 보장할 수 있습니다.
Adipoq-iCre 마우스 모델은(제품 번호: C001529) 대사 연구 및 지방세포 생물학을 집중적으로 연구하는 연구자들에게 최첨단 연구 솔루션을 제공합니다. 이 마우스 모델은 백색 지방 조직(WAT)과 갈색 지방 조직(BAT)을 정밀하게 타겟팅할 수 있으며, 통합적인 형광 검출 솔루션을 통해 고품질 연구 결과와 향상된 연구 능력을 보장합니다. 형광 검출의 일반적인 문제를 극복하고, Cyagen의 Adipoq-iCre 마우스 모델로 연구를 최적화해 보세요.
Adipoq-iCre 마우스 모델에 대한 자세한 정보는 Cyagen 웹사이트에서 확인할 수 있습니다. Cyagen 웹사이트를 통해 혁신적인 연구 모델이 어떻게 연구를 한 단계 더 발전시킬 수 있는지 알아보세요. Cyagen은 연구자 여러분이 더 정확하고 의미 있는 연구 결과를 얻을 수 있도록 최선을 다해 지원합니다. 맞춤형 연구 지원 서비스가 필요하시거나 연구 모델 주문을 원하신다면 지금 바로 문의해 주시고, Cyagen과 함께 다음 단계로 나가보아요!
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