녹아웃(KO) 마우스 | Cyagen Korea

IL-4-IRES-eGFP (4get) 리포터 마우스

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Model Description

Background: BALB/c

이 모델은 IL-4 분비세포에 대한 확실한 추적과 sorting으로 Th2 면역 응답 분극을 효과적으로 그릴 수 있는 강력한 약물 테스트 도구로,

● 조직 상주 대식세포로 생기는 만성 염증을 연구할 수 있고;

● 알레르기 천식과 관련된 기도 염증을 연구할 수 있다.

 

이러한 IL-4 리포터 마우스 모델은 광범위하게 사용 및 검증되어 60여개의 유명한 저널에 보도된 바 있다.

 

Strain 설명:

  • IL-4는 마우스 체내에서 정상적인 생리적 발현과 조절 모드 구비
  • eGFP 리포터 유전자는 IL-4의 발현을 진실되게 반영하였음

 

IL-4는 Th2 세포의 전형적인 바이오 마커이며 면역 응답을 체액 면역 방향의 분극을 통하여 초기 보조 T세포가 Th2세포로 분화하도록 유도할 수 있다. 이 모델은 기타 기존에 무작위 삽입 방식으로 제작된 IL-4 리포터 마우스 모델에 비해 IL-4의 생리적 발현을 보류하였고 또한 Th2의 활성을 모니터링할 수 있다.

 

내인성 IL-4는 정상적인 생리적 발현 구비:

  • 내인성 IL-4가 발현되고 작용 발휘: 리포터 유전자를 내인성 IL-4 유전자 자리의 3'UTR에 삽입한다.
  • 삽입한 유전자 서열이 조절된다.
  • 리포터 유전자가 IL-4의 발현을 진실되게 반영하였다.

 

Th2 분극 추적 가능:

  • eGFP의 발현을 모니터링하여 IL-4를 발현하는 세포를 직접 검출할 수 있다(그림 1).
  • 면역체계 영향 받지 않음: 감염이나 공격에 응답하여 온전한 IL-4를 생성할 수 있다(그림 2).
  • Th2 세포 이전과 cell sorting을 모니터링할 수 있다.

 

Model Validation

그림 1. eGFP의 발현은 T세포에서 발현된 IL-4와 연관이 있으며 IL-4의 발현 수준을 반영한다.

(A) Th1과 달리 Th2는 4get 세포의 eGFP가 존재하는 특이성 조건에서 eGFP의 대량 발현을 유도할 수 있어 IL-4의 발현 상황을 반영하였다.

정제된 초기 CD4+ eGFP homozygous 4get T 세포를 PKH26 적색 형광으로 표기한다. CD4+ 세포에 게이팅 후 항원제시세포가 존재하는 상황에서 Th1, 중성 또는 Th2 조건에서 세포를 배양하고 4일째에 분석을 진행한다.

(B) Th2 조건에서만 4get 세포가 특이성으로 IL-4를 발현한다.

보체 분열을 통해 야생형(+/+, 공백 막대), Heterozygous(+/4get, 음영 막대) 및 Homozygous(4get/4get, 짙은색 막대) 4get 마우스 비장세포의 CD8+ 세포를 소진하고 Th1 또는 Th2 조건에서 5일간 자극한다. 세포 세척 후 다시 자극하고 48시간 후 상청액을 수집하여 ELISA로 IL-4와 IFN-γ를 분석한다.

 

Model Validation

그림 2. 브라질 젖산균에 감염된 4get 마우스에서 4get 세포응답으로 IL-4가 생성된다.

Homozygous 4get 마우스가 브라질 젖산균에 감염되었다. 10일 후 폐, 장간막 림프선(MLN), 외주 림프선(PLN)과 비장(SPL)에 대해 FACS 분석을 진행한다. 앞방향과 옆방향에 림프구 게이팅에서 세포CD4와 eGFP의 발현을 검출한다. 상한(象限)의 숫자로 백분율을 표시한다.

 

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Category Strain Name Background Order Amount
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Digital Resources:

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Catalog - 2021
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1. Mohrs M; Shinkai K; Mohrs K; Locksley RM.2001. Analysis of type 2 immunity in vivo with a bicistronic IL-4 reporter. Immunity 15 (2): 303-11.

2. Sofi MH; Qiao Y; Ansel KM; Kubo M; Chang CH.2011. Induction and Maintenance of IL-4 Expression Are Regulated Differently by the 3' Enhancer in CD4 T Cells. J Immunol 186 (5) : 2792-9.

3. Wu D; Molofsky AB; Liang HE; Ricardo-Gonzalez RR; Jouihan HA; Bando JK; Chawla A; Locksley RM.2011.Eosinophils sustain adipose alternatively activated macrophages associated with glucose homeostasis. Science 332 (6026) : 243-7.

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