그러나 Transgenic(Tg) 마우스와 coding sequence(CDS), single-exon 인간화 마우스와 같이 기존 일반 인간화 모델은 인간 유전자의 일부를 마우스 게놈에 삽입할 수 있습니다.
질병 메커니즘 연구와 관련 약물 개발의 발전을 촉진하기 위해 게놈 인간화 마우스 모델을 사용해야 합니다. 그러나 전체 게놈 DNA 서열 대체를 달성하는 데는 기술적인 문제를 일으킵니다.
위와 같은 요구에 따라 Cyagen은 HUGO-GT™(Humanized Genomic Ortholog for Gene Therapy) 프로그램을 출시했습니다.
타겟 마우스 내재유전자의 in-situ replacement를 달성하고 더 넓은 범위의 대상을 포함하는 full-length genomic sequence 인간화 마우스 모델을 성공적으로 구축했습니다.
HUGO-GT™ 마우스는 보다 효율적인 대단위 백터 융합 기술을 사용하여 타겟 돌연변이 발생 맞춤화 서비스를 위한 다용도 템플릿 역할을 하며 실제 생물학적 메커니즘에 밀접하게 정렬된 임상모델을 제공합니다.
인간 RHO 유전자에 의해 암호화된 로돕신 단백질(Rhodopsin)은 신호 전달에 필수적인 역할을 하며 RHO 유전자의 돌연변이는 망막색소변성증(Retinitis Pigmentosa; RP), 선천성 정지성 야맹증(Congenital Stationary Night Blindness; CSNB) 등 안과 질환과 관련이 있는 것으로 확인되었습니다. 현재 RHO를 표적으로 하는 유전자 치료법은 ASO와 CRISPR 등이 개발되어 있습니다. HUGO-GT™ 전체 게놈 DNA 인간화 동물 모델의 적용은 HUGO-GT™ 전체 게놈 DNA 인간화 동물 모델의 적용은 잠재적인 RHO 관련 잠재적 치료법을 임상시험으로 전환하는 데 도움이 될 것입니다.
Cyagen은 배아 줄기세포(ES) 유전자 편집 및 타겟팅 기술을 활용하여 C57BL/6J 마우스 Rho 유전자 ATG 프로모터부터downstream 500bp까지의 단편을 인간 RHO 유전자 ATG 프로모터부터 downstream 500bp까지의 단편으로 교체하여 B6-hRHO 마우스를 제작하고 이를 기반으로 hot spot mutation 마우스인 B6-hRHO(P23H) 모델을 제작했습니다.
연구 결과에 따라 인간 유전자에 의해 암호화된 RHO 단백질은 B6-hRHO 마우스에서 정상적으로 발현되어 망막 형태와 기능이 시각적 결함이 없는 야생형 마우스와 동일합니다. 반면, B6-hRHO(P23H) Point mutation 마우스는 망막색소변성증 표현형을 나타낸 것을 확인하였습니다. 이는 B6-hRHO 및 B6-hRHO(P23H) 마우스 모델을 성공적으로 제작하고 망막색소변성증의 발병 메커니즘 규명 및 관련 신약 개발에 활용될 수 있다는 것을 밝혔습니다.
