녹아웃(KO) 마우스 | Cyagen Korea

PD-1 인간화 마우스


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Background: C57BL/6N

제작 전략:

마우스 PD-1 유전자 자리에 인간 PD-1세포외 영역 서열을 녹인하고 마우스 막횡단영역과 세포내 영역을 보류하여 키메라형 PD-1 인간화 마우스 모델을 제작한다.

Strain 설명:

  • ●   hPD-1은 마우스 체내에서 정상적인 생리적 발현과 조절 모드 구비
  • ●   PD-1의 세포외 영역 인간화는 hPD-1 표적 약물의 식별에 유리
  • ●   마우스 PD-1 세포내 영역 보류로 정상적인 세포내 신호 전달 보장
  • ●   마우스 타겟 유전자가 발현하지 않아 교차 반응 피함
  • ●   마우스의 면역체계 기능 완비

연구 응용:

이 모델은 면역체계가 완비된 마우스 체내에서 hPD-1 표적 약물의 유효성과 안전성을 평가하는 데 사용할 수 있다.

●   인간화 종양 세포계와의 결합

예: MC38-hPD-L1 종양 세포계와 결합을 통해 상동성 종양 모델을 제작하여 표적 hPD-1과 hPD-L1의 결합 요법의 치료 효과를 테스트한다.

●   기타 면역 체크포인트 인간화 마우스와의 교잡

예: hVISTA 마우스와 교잡하여 얻은 이중 인간화 hPD-1/hVISTA 마우스 모델에서 표적 hPD-1과/혹은 hVISTA의 두 가지 약물을 평가한다.

모델 검증:

●   PD-1 발현 검사

그림 1. hPD-1 마우스에서 hPD-1의 발현 모드와 야생형 마우스에서 mPD-1의 발현 모드 일치

hPD-1과 mPD-1의 αCD3/αCD28 항체 활성화 후 hPD-1 마우스 및 야생형 마우스 비장 세포 내의 발현상황: (A) Treg 서브세트, CD4+ 서브세트(CD3+CD4+Foxp3-)와 (B) CD8+ T(CD3+CD8+) 서브세트

그림 2. hPD-1 마우스 종양 침윤 림프구에서 hPD-1의 발현

MC38 종양 세포를 접종 30일 후의 야생형 마우스와 hPD-1 마우스에서 종양 침윤 림프구(TILs)를 분리한다. hPD-1 마우스는 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에서 hPD-1 단백질을 발현하고 야생형 마우스는 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에서 mPD-1 단백질을 발현한다.

●   PD-1 기능 검사

그림 3. T세포의 활성화(IL-2과 증식 발생)는 야생형 마우스와 hPD-1 마우스 간 별반 차이 없다.

(A) ELISA법으로 αCD3/αCD28 활성화를 거친 야생형 마우스와 hPD-1 마우스 비장 세포 상청액 중 IL-2 생성 상황 측정; (B) αCD3 항체 활성화를 거친 4일째의 비장과 림프선 중 CD4+ T세포 서브세트(CD4+ CD25-) 내 CFSE 희석도

●   체내 약효 실험

그림 4. hPD-1 마우스 체내에서 hPD-1 단일클론의 항종양 활성화가 관찰된다.

(A) hPD-1 마우스에 MC38마우스의 결장 직장 암세포를 접종 후 28일째에, 각각 A, B, C 세가지 αhPD-1 단일클론 및 동형대조으로 처리된 부피. (B) 야생형과 hPD-1 마우스 뇌에 GL261 마우스 교종 세포 접종 후, αhPD-1 항체 또는 αmPD-1 항체로 처리한다. αhPD-1항체 처리는 hPD-1 마우스의 생존율을 현저하게 높일 수 있다.

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