녹아웃(KO) 마우스 | Cyagen Korea

hGITR/Foxp3 리포터 마우스

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Model Description

Background: C57BL/6N × C57BL/6N×C57BL/6J (GITR은 C57BL/6N에서 유래, Foxp3는 C57BL/6J에서 유래)

이 모델은 표적 면역 체크포인트 GITR의 약물에 대해 체내 유효성 평가 및 분석을 진행할 수 있다. 이밖에 이 모델은 Foxp3 프로모터에 의해 조절되는 적색 형광 단백질을 통해 서로 다른 림프구 혈통과 림프기관에서 Foxp3를 발현하는 세포를 효과적으로 추적 및 구분할 수 있게 한다.

 

제작 전략:

hGITR/Foxp3 마우스 모델은 hGITR마우스와 Foxp3-IRES-mRFP(FIR) 마우스의 교잡을 통하여 얻는다.

hGITR 마우스 모델이 키메라형 GITR 단백질 발현: 마우스 GITR 유전자 자리에 인간 GITR 세포외 영역 서열을 녹인하고 마우스 세포내 영역을 보류 후 마우스 GITR 내인성 프로모터로 구동한다.

적색 형광 단백질(RFP)을 발현하는 FIR의 이중 리포터 유전자(bicistronic reporter)를 내인성 Foxp 3 유전자 자리에 녹인하고 mRFP 리포터 유전자는 Foxp3의 발현을 진실되게 반영하였다.

 

Strain 설명:

  • GITR 세포외 영역 온전히 인간화
  • hGITR은 마우스 체내에서 정상적인 생리적 발현과 조절 모드 구비
  • 마우스의 면역체계 기능 완비
  • 마우스 GITR 미발현, 교차 반응 피함
  • mRFP 리포터 유전자는 Foxp3의 발현을 진실되게 반영하였음
  • 내인성 Foxp3의 발현은 유전자 삽입의 영향을 받지 않음

 

● GITR 발현 검사

Model Validation

그림 1. hGITR/Foxp3 마우스에서 hGITR의 발현 모드와 야생형 마우스에서 mGITR의 발현 모드 일치

야생형과 hGITR/Foxp3 마우스 비장세포에 대해 αCD3/αCD28 항체 자극(5일)을 진행하고, Treg세포와 전통 CD4+T세포에서의 mGITR과 hGITR의 발현 상황을 유세포분석을 진행한다.

 

● RFP와 Foxp3 발현 검사

Model Validation

그림 2. RFP 발현은 Foxp3의 발현을 반영 가능

hGITR/Foxp3 마우스에서 세포막 비투과성(A) 또는 세포막 투과성(B)의 분리된 비장세포(CD3+CD4+)에서 mRFP의 발현이다. mRFP+ 세포에 대해 sorting과 permeablization을 진행하여 Foxp3(C)을 검출한다.

 

● 기능 검사

Model Validation

그림 3. Treg 세포가 면역 반응에 대한 억제성 조절 작용을 보류

효과 T세포(CD4+CD25-)를 분리하고 CTV로 표기하며, 마이토마이신과 αCD3로 4일간 처리한 항원제시세포가 존재하는 상황에서 효과 T세포와 서로 다른 농도의 RFP+ Treg세포를 공배양한다. 유세포술(CTV+세포)로 효과 T세포의 증식 상황을 검사한다.

 

Model Validation

그림 4. hGITR 마우스 체내에서 hGITR 단일클론의 처리는 항종양 작용 발휘 가능

αhGITR 항체의 처리 하에 종양보유 hGITR 마우스(MB49 방광암세포)의 체내 종양 성장이 억제된다.

 

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Category Strain Name Background Order Amount
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Reporter Mouse Models hGITR/Foxp3 / / /

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  • Sex: Female
  • Age: 3 to 8 weeks
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Digital Resources:

hGITR/Foxp3 Reporter Mouse
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Cyagen은 대한민국 지역에서 genOway의 마우스 모델에 대한 독점대리권을 가지고 있습니다.
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