녹아웃(KO) 마우스 | Cyagen Korea

 

연구 방향을 조정하고 학술 연구의 돌파구를 얻고 싶습니까? 높은 점수 문장 보낼 기회가 있나요? 너는 학과 발전 태세와 미래 동향을 이해해야 합니다!Cyagen 생물학 칼럼' Gene of the Week' 은 매주 핫스팟 연구 분야에 따라 유전자를 소개하고 유전자 기본 정보, 연구 개요, 응용 배경 등을 상세히 소개하며 학술 연구의 예민함을 유지하고 과학 연구의 효율성을 높이며 지속적인 관심을 기대합니다.오늘 우리가 이야기할 주인공은 차세대 면역치료 표적인 OX40 입니다.

 

면역검사포인트는 면역세포가 가진 한 조가 면역응답의 지구성을 조절·통제하면서 자기 내성을 유지하는 신호통로 분자를 말합니다.면역 검사점은 자극성이나 억제성이 될 수 있습니다. 면역응답의 효능은 공자극 신호와 공억제 신호 사이의 미묘한 균형에 의해 결정합니다.항원성의 MHC/펩타이드 복합체와 T세포 수용체의 상호작용을 유도하는 신호전달은 T세포 활성화의 선결조건이지만 T세포반응을 단독으로 작동시키기에는 부족합니다.공자극 분자의 진일보한 신호전달은 T세포의 최적의 시동, 확장, 분화에 매우 중요합니다.이 분자들은 면역 글로불린 초가족 (IgSF) 과 종양 괴사인자 수용체 초가족 (TNFRSF) 의 두 가지 주요 범주로 나뉩니다. OX40 은 종양 괴사인자 수용체 초가족 멤버 4(TNFRSF4) 로 중요한 T 세포 공자극분자로 PD-1/L1 에 이어 또 다른 혁신 시장으로 꼽힙니다.

 

OX40(CD134) 은 1 형 크로스막 당 단백질로, OX40L 은 OX40 의 리간드(ligand)이며, 활성화된 CD4, CD8 T 세포 및 기타 여러 림프와 비림프세포에서 표현되고, T 세포, 항원 제시 세포(APC) 및 자연 살상 (NK) 세포에 의해 생성되는 세포인자를 조절하며, 세포인자 수용체의 신호를 조절합니다.

 

OX40은 항멸(Bcl-2, Bcl-xl, Bfl-1)과 세포주기 (Survivin) 단백질의 표현을 유도할 수 있습니다. OX40 은 면역세포 (CD4+와 CD8+T 림프세포, NK 세포, B 림프세포 포함) 의 억제를 상쇄하는 동시에 효과 T 세포를 직접 자극합니다.

 

 

그림 1. OX40의 작용 메커니즘

 

항CTLA-4 치료의 경우 FC 수용체를 표현하는 대식세포를 통해 TME 에서 Treg 세포를 선택적으로 제거한다는 증거가 있습니다. 이는 OX40 방향 항체 역시 해당 수용체를 표현하는 효과 T 세포를 감소시키지 않고 TME 에서 OX40+ Treg 를 소비할 수 있다는 것을 보여줍니다.Zhang 등은 OX40 의 공자극이 FOXP3 유전자 표현의 억제를 유발한다는 것을 보여주는데, 이는 Treg 분화에 매우 중요합니다.이것은 활성화 단백질 1 전사 인자 BATF, BATF3 의 표현, AKT- 라파마이신을 활성화시키는 포유류 표적 (mTOR) 의 두 가지 독립적인 메커니즘을 통해 이루어집니다.임상 전 모델에서는 항OX40단클론항체(mAb) 처리 후 종양침윤 Treg세포가 IL-10의 발생을 떨어뜨려 돌상세포(DC)를 성숙시킨다는 증거가 있는데 이는 전사적 인자인 교란소 조절 인자인 1mRNA의 표현을 낮췄기 때문으로 보입니다.따라서 일종의 허용된 면역 상태가 발생하고, myeloid의 축적과 선천성과 적응성 면역의 발달로 이어져 OX40의 항종양 작용에 중요한 단계다.

 

공자극 수용체를 표적 치료로 종양에 대한 면역반응을 증강시키는 생물학적 원리를 고려하여 체외 결과에 기초하여 OX40 신호전달을 자극하는 약물들이 개발되었으며, OX40 특이성 격동제 항체, OX40L-Fc융합단백질, OX40L mRNA로 DC에 전염, 그리고 OX40L을 표면에 표현하는 종양세포로 개조되었습니다.

 

 

표 1. OX40을 타깃으로 한 약물

 

몇 가지 임상전 암모형에서는 OX40에 대한 면역세포 조절과 항종양 활성, 항OX40과 항CTLA-4의 합동치료로 CD4+와 CD8+T세포의 증식과 활성이 증가하여 항OX40 단약치료보다 더 좋은 결과로 나타나고 있습니다.OX40 표적 치료는 종양 마우스 모델에게 인상적인 결과를 보였지만, 초기 임상수치로 단일 요법으로서의 인간 치료 효과는 높지 않은 것으로 나타났습니다.OX40 공자극은 항 PD-1 및 항 PD-L1 과 같은 억제 수용체에 대한 면역요법과 함께 사용하는 것이 유망한 전략입니다. 연합요법이 하루빨리 임상연구에서 검증을 받아 더 많은 환자에게 혁신적인 치료법을 가져다 줄 것으로 기대하고 있습니다.

 

 

참고 문헌:.

1. Silva C A C, Facchinetti F, Routy B, et al. New pathways in immune stimulation: targeting OX40[J]. ESMO Open, 2020, 5(1).

2. Webb G J, Hirschfield G M, Lane P J L. OX40, OX40L and Autoimmunity: a Comprehensive Review[J]. Clinical Reviews in Allergy & Immunology, 2016, 50(3):312-332.

 

 

Cyagen생물 OX40 인원화 마우스,종양 연구를 돕다

 

품계배경:C57BL/6N

 

품계 구축 전략:

마우스 OX40 유전자 위치에서 사람 OX40을 녹인하여(Knock in) 구축하였습니다.이 인간화 모델은 전 인간화된 OX40 단백질을 표현했는데, 이는 인간화세포 외, transmembrane과 세포 내 구조역을 포함합니다.

 

품계 설명:

hOX40 마우스의 체내 표현은 정상적인 생리 표현과 조절 패턴을 가지고 있습니다.

■ 표적지와 배체의 상호작용을 보존했습니다.

■ 마우스의 면역 체계의 기능이 건전합니다.

■  마우스 표적 유전자 표현이 부족해 교차반응을 피했습니다.

 

연구 응용:

면역체계 기능이 건전한 쥐에서 표적인 면역검사점 OX40 의 면역종양 약물의 체내 효능 평가와 분석을 할 수 있습니다.

 

모델 인증:

 

 

그림 2.  hOX40 표현 패턴은 mOX40 의 야생형 마우스의 표현 패턴과 일치합니다.mIL-2 의 존재를 전제로, αCD3 /αCD28 을 이용하여 비장 세포를 활성화시키고、hOX40 과 mOX4 는 각각 hOX40 마우스와 야생형 마우스(A)의 Tregs 아군 (viable, CD3+CD4+CD25+Foxp3+)、(B) CD4+(viable, CD3+CD4+Foxp3+)와 (C) CD8+(CD3+CD8+) T세포에서 각각 표현합니다.hOX40과 mOX40은 hOX40 마우스와 야생 마우스의 (D)Treg, (E)전통 CD4와 (F)CD8 T세포에서 동력학을 표현합니다.

 

 

그림 3. hOX40은 체외에서 효과 T세포에 작용합니다.αCD3/αCD28 비장과 림프절로부터 분리된 T세포(CD8+T세포)를 활성화합니다.hOX40L 또는 IgG-Fc 는 CD8+T 세포를 처리할때 hOX40L처리로 인간화 OX40 마우스의 CD8+T 세포 증식과 IFNγ 의 분비를 크게 촉진한 것을 볼 수 있습니다.(A) 흐름도(Flow chart) (B) 대표 직방도(C)ELISA 검출 배양 상청액(supernate) mIFN-γ 생산.

 

 

 

그림 4.  αhOX40은 hOX40 마우스의 체내에서 항종양 활성성을 가지고 있습니다.MC38 종양을 이식한 hOX40 마우스를 αhOX40(BMS-986178유사체) 로 처리했다. 종양의 증식은 분명히 억제되었습니다.

 

마우스 종양 모형은 종양 발생 발전 메커니즘, 약물 선별 및 효능 평가를 연구하는 데 없어서는 안 될 도구입니다.Cyagen바이오 모델 동물 혁신 약물 개발 플랫폼은 당신에게 다양한 유형의 종양 모델을 제공할 수 있습니다.예를 들어 BALB/c nude (누드 마우스), NOD scid, C-NKG, BRGSF 와 같은 면역 결함 마우스, 면역 검사점 인간화 마우스, 종양 세포계 이식 모델, 인간 종양 조직 이종 이식 모델 (CDX), 유전자 수정 모형, 표현형 분석 서비스 등이 있습니다.필요하시면 저희에게 연락 주세요.

 

 

 

About Cyagen

Cyagen은 15 년 동안 발전해 전 세계 수만 명의 과학자에게 봉사했으며, 제품과 기술은 CNS(Cell, Nature, Science) 3 대 저널을 포함한 4500 여 편의 학술 논문에 직접 적용되었습니다.유전자녹아웃,  유전자노크인, 조건부 녹아웃 모델 맞춤형 서비스 외에도 Cyagen에는 전문적인 수술질환 모델팀이 있어 다양하고 세밀한 작은 동물수술 질병모델을 제공할 수 있습니다. 약물선별평가 마우스 플랫폼은 구미 업계 리더로부터 도입한 면역결핍마우스, 심혈관 및 알츠하이머병 등의 연구에 사용되는 인간화 마우스를 제공할 수 있습니다. 국제 표준화 무균마우스 기술 플랫폼은 무균마우스, 무균동물 맞춤형 서비스, 미생물 균군 이식 서비스 등 무균동물 모델에 기반한 각종 제품과 서비스를 제공할 수 있으며, Cyagen의 성숙하고 안정적인 유전자 편집 마우스 플랫폼과 결합하여 균군과 유전자의 상호작용 메커니즘을 연구하는데 도움을 줄 수 있습니다.

 

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